当在AWS Lambda层中调用/opt/ffmpeg时显示"/opt/ffmpeg不是目录"错误信息，可能是因为Lambda层中未正确安装ffmpeg或者/opt/ffmpeg路径不正确。

以下是一种解决方法，包括一个示例代码：

1. 确保/opt/ffmpeg路径正确： 在Lambda层中，确保/opt/ffmpeg目录存在，并且该目录中包含ffmpeg可执行文件。可以使用以下命令在Lambda层中安装ffmpeg：

mkdir -p /opt/ffmpeg
cd /opt/ffmpeg
wget https://johnvansickle.com/ffmpeg/releases/ffmpeg-release-amd64-static.tar.xz
tar xvf ffmpeg-release-amd64-static.tar.xz

2. 使用正确的路径调用ffmpeg： 使用正确的路径调用ffmpeg可执行文件。在示例代码中，可以使用/opt/ffmpeg/ffmpeg路径调用ffmpeg命令。

以下是一个示例的Python代码，展示如何在AWS Lambda层中使用/opt/ffmpeg路径调用ffmpeg：

import subprocess

def lambda_handler(event, context):
    try:
        # 使用/opt/ffmpeg/ffmpeg路径调用ffmpeg命令
        cmd = "/opt/ffmpeg/ffmpeg -i input.mp4 output.mp4"
        subprocess.call(cmd, shell=True)
        return "Success"
    except Exception as e:
        return str(e)

通过使用正确的路径和正确安装ffmpeg，您应该能够解决"/opt/ffmpeg不是目录"错误信息。请注意，示例中的路径和命令可能需要根据您的实际情况进行修改。