首先，确保application.js文件被正确链接到你的HTML文件中，并且没有其他错误或警告。

如果application.js中定义的函数不起作用，可能是由于以下几个原因：

1. 函数没有被正确调用：在HTML文件中调用函数时，确保函数名和参数的拼写和大小写都是正确的。例如，如果定义了一个名为myFunction的函数，应该使用myFunction()来调用它，而不是MyFunction()或myfunction()。

2. 函数定义的位置不正确：确保函数定义在调用它的代码之前。在application.js文件中，通常将所有函数定义放在文件的顶部或底部。

3. 函数没有正确绑定到事件：如果你尝试通过事件（如点击按钮）来触发函数，确保事件和函数的绑定是正确的。例如，如果你有一个按钮元素，并希望在点击按钮时调用myFunction函数，可以使用以下代码：

Click me

4. 函数中的语法错误：检查函数中是否存在语法错误，例如缺少括号、分号、引号等。在开发者工具的控制台中查看是否有任何错误消息。

5. 其他JavaScript错误：检查控制台是否有其他JavaScript错误或警告消息。这些错误可能会导致其他代码无法运行。

如果以上方法都没有解决问题，可以尝试在控制台中打印一些调试信息，以便更好地理解代码的执行流程。例如，在函数的开头或末尾添加一行类似于console.log("Function is called")的语句，然后在浏览器的开发者工具控制台中查看是否输出了该信息。

最后，如果问题仍然存在，可以将application.js文件的代码和相关HTML代码提供给其他人进行审查，以寻求更多的帮助。